Sisu
- Tuvastamine värvimuutustega
- Mõõtmiseks kasutatakse ELISA lugejat
- Otsene konkurentsivõimeline ELISA (tsütokroom c)
- Inkubeerige primaarset antikeha tuubides
ELISA test on ensüümiga seotud immunosorbenttesti, mis kasutab antikeha või antigeeni kontsentratsiooni määramiseks spetsiifilise ensüümiga seotud antikehi või antigeene. Kui te võtate ELISA-testi ja ei suuda oma tulemuste saamiseks kasutada spetsiifilisi antikehi, siis soovitatakse konkureerivat ELISA-d, kuna see kasutab antikeha asemel konjugeeritud antigeeni ja erinevat tuvastamismeetodit.
Tuvastamine värvimuutustega
Konkurentsivõimelise ELISA ühine protokoll on märgistamata ja puhastatud primaarse antikeha kasutamine. Antikeha katab mikrotiiterplaadi süvendid ja inkubeeritakse tundmatute standarditega. Seejärel lisatakse primaarse antikehaga konjugaadile immunogeen, mis seondub veel hõivatud antikeha kohtadega. Seejärel kasutatakse substraati värvimuutuse loomiseks seondumise kontsentratsiooni mõõtmiseks.
Mõõtmiseks kasutatakse ELISA lugejat
Kasutage mikrotiiterpolüstüreenplaati ja lisage igasse süvendisse primaarne antikeha. Maksimaalse seondumise saavutamiseks täitke süvend ühe mikrogrammi antikehaga. Inkubeerige plaati neli tundi toatemperatuuril. Lisage esmane püüdmisantikeha ja peske süvendid PBS-ga (fosfaatpuhverdatud soolalahus). Inkubeerige plaate blokeerimispuhvriga toatemperatuuril kaks tundi. Peske süvendid kaks korda uuesti PBS-iga ja lisage standardid. Asetage antigeeni konjugaadi lahus süvenditesse ja inkubeerige uuesti kaks tundi. Plaati pestakse uuesti PBS-iga neli korda. Lisage substraat ja mõõdetakse tihedused konkreetsel lainepikkusel, kasutades ELISA lugejat.
Otsene konkurentsivõimeline ELISA (tsütokroom c)
Otsese konkureeriva ELISA puhul tuleb läbi viia katses kasutatava antigeeni seerumi lahjenduse analüüs. Seejärel kaetakse mikrotiiterplaat tsütokroom c-ga ja inkubeeriti üleöö. Seejärel viiakse analüüsi ELISA osa läbi blokeeriva reagendi ja sekundaarse antikeha lisamisega. Absorbeerimise tulemusi loetakse mikroplaadi lugejaga.
Inkubeerige primaarset antikeha tuubides
Selles protseduuris inkubeeritakse primaarset antikeha katseklaasidesse, milles huvipakkuv antigeen seondub sellega. Seejärel lisatakse proovid mikrotiiterplaatide süvenditesse ja inkubeeritakse. Seejärel pestakse süvendid mis tahes seondumata antigeeni-antikeha komplekside eemaldamiseks ja seejärel lisatakse blokeeriv lahus, et vältida teise antikeha seondumist süvenditega. Seejärel saadakse tulemuste saamiseks loenduril sekundaarne antikeha.