Sisu
Tuberkuloos on nakkushaigus, mille põhjustab bakter Mycobacterium tuberculosis ja see on hingamisteede haigus, mida iseloomustavad mugula moodustised, nekroos, abstsessid, fibroos ja lupjumine kopsudes. See võib nakatada ka neere, lümfisõlmi, luid, liigeseid ja nahka.
Selle batsilli esmane laboratoorne diagnoos hõlmab selle värvimist, et mikroskoobi all olevaid baktereid visualiseerida. Valitav proov on röga või bronhoalveolaarne loputus hingamisteede infektsiooni tuvastamiseks või tegeliku koe proov.
Füsioloogia
Mycobacterium tuberculosis on vardakujuline organism (batsillid), liikumatu, mitte kohustuslik eos. Selle bakteri mõõtmed on 0,4x3 mikromeetrit ja see läbib binaarse lõhustumise (paljunemisrakkude jagunemine) iga 15–24 tunni järel, mida peetakse teiste bakteritega võrreldes aeglaseks. Seetõttu võib mükobakterite ilmumine kultuurikeskkonda võtta kuni üheksa nädalat.
See organism on tundlik UV-valguse ja kuumuse suhtes (näiteks pastöriseerimine), kuid peab vastu keemilistele desinfektsioonivahenditele.
Grammiplekk
Tuberkuloosi Mycobacterium tuberkuloosi ei saa tõesti grampositiivseks ega gramnegatiivseks klassifitseerida. See klassifikatsioon põhineb peptidoglükaani kogusel bakteri rakuseinas. Grampositiivsel liigil on selle molekuli paks kiht (umbes 90%), gramnegatiivsel liigil on õhuke kiht (5% kuni 20%). Grammiplekid tungivad läbi rakuseina ja seonduvad selles sisalduvate keemiliste komponentidega. Mikroskoobi all muutuvad värvunud bakterid lillaks või roosaks.
Mükobakteri tuberkuloosi korral koosneb rakusein peptidoglükaanist, aga ka komplekssetest lipiididest, mis pärsivad grammivärvide läbitungimist. Rakusein peab vastu ka happe või alkoholi värvimuutustele, mistõttu mükobakterit nimetatakse "happekindlaks". Rakuseina lipiidid on mükoolhape, nöörfaktor ja D-vaha. Kui bakterid värvitaks, tunduksid rakud grampositiivsed või kergelt kahvatud ja väga vähese värvusega.
Bakterite nägemiseks tuleb kasutada spetsiaalseid plekke, näiteks Aumarine või Zhiel-Neelsoni plekke.
Aumariini-rodamiini plekk
Auramiin-rodamiini kasutamisel kasutatakse kollast fluorestsentsvärvi, et visualiseerida mycobacterium tuberculosis fluorestsentsmikroskoobi all. Kontrastvärvina võib kasutada kaaliumpermanganaati või akridiinoranži. Läätse all näivad bakterirakud rohelised.
Auramiin-rodamiinvärv on tundlikum kui Zhiel-Neelson ja majanduslikult tasuvam.
Ziehl-Neelsoni värvimine
Ziehl-Neelsoni pleki lõid teadlased Franz Ziehl ja Friedrich Neelsen ning selles kasutatakse kuumutatud karbool-fuksiini, kõrge happe-alkoholi kontsentratsiooni ja kontrastvärvi, näiteks rohelist malahhiiti või metüleensinist. Fluorestsentsmikroskoobi all näivad bakterirakud erkroosasid.
Värv Ziehl-Neelson on tipptaseme standard mycobacterium tuberculosis ja mycobacterium leprae esialgsel tuvastamisel.
Agar
Sekundaarne mikroskoopia tuvastamise järel tuleb mycobacterium tuberculosis kasvatada spetsiaalsel agarkultuuril. Lowenstein-Jenseni želatiinil on keerukad orgaanilised ained (näiteks munad ja kartulid), soolad, glütserool ja malahhiitroheline (mis pärsib teisi baktereid). Saastavate mikroorganismide edasiseks pärssimiseks võib lisada antibiootikume. Proov asetatakse sellele agarile ja bakterid kasvavad kolme kuni üheksa nädala jooksul.
Toitainekultuurilahust, nagu albumiin ja biotiin, saab kasutada ka kõige väiksema sihtbakteri kasvu toetamiseks. See on tuntud kui Middlebrook 7H9 (või 7H12).
Mõlemas keskkonnas ilmuvad kolooniad väikeste, poleeritud helepruunide kolooniatena.
Arenenud tehnoloogia abil saab mükobakterit tuberkuloosi nüüd automatiseeritud lugeja abil kasvatada. Kasvu jälgimiseks ning positiivsest või negatiivsest infektsioonist teatamiseks kasutatakse keskmist vedelikku Middlebrook 7H9 keskkonda ja fluorestseerivat indikaatorühendit.