Sisu
Agaroosgeele valmistavad molekulaarbioloogia laboratooriumides töötavad teadlased, et uurida DNA fragmente, mis on eksperimentaalse töö käigus modifitseeritud. Agaroosgeeli valmistamise tehnika on põhiline rutiinne oskus, mida peavad kõik teadlased omandama, kuna see võimaldab otsest visualiseerimist erinevate suuruste DNA-d kontrollimiseks ja geenikloonimise projektide jaoks. Kuigi geelipreparaat ei ole raske, nagu kõigi laboratoorsete protseduuride puhul, peaks seda proovima ainult professionaalne spetsialist, kes on seotud bioloogiliste ohtudega.
Juhised
-
Veenduge, et geeli alustel ei oleks pragusid ega midagi, mis võiks põhjustada kuuma agaroosi lekke. Puhastage plaate 70% alkoholiga ja laske täielikult kuivada. Alusel on kaks avatud otsa ja kaks suletud otsa. Mõnes vormingus on nende külge kinnitatud klambrid otsade sulgemiseks, kuid enamik neist peab olema suletud, asetades lindi ribad avatud osade vahele. Vajutage lint kindlalt ja kindlalt, kuna need võivad hoidikust eemale liikuda ja kuumale agaroosile lekkida.
-
Lähtudes eraldatava ja agaroosgeelil analüüsitava DNA fragmendi suurusest, määrake vajalik protsent. Näiteks 1% (w / v) juures on agaroosgeel efektiivne 0,5 kuni 10 kb DNA segmentide analüüsimiseks. Mida suurem on protsent (rohkem agaroosi), seda väiksemad on fragmendid, mida saab eraldada. Rutiinsetes katsetes kasutatakse vahemikku 0,5% kuni 2% agaroosi. 1% agaroosgeeli puhul kaalutakse 1 g agaroosipulbrit kemikaalikihis või mõnes muus kaitsesüsteemis. Viige ettevaatlikult geeli laboratoorsesse ettevalmistuspiirkonda.
-
Sobivas geeli valmistamise piirkonnas mõõdetakse 100 ml elektroforeesipuhvrit. See peaks olema toatemperatuuril. Viige agaroosipulber tulekindlasse kolbi ja valage mõõdetud elektroforeesipuhvri maht. Kuumutage segu ettevaatlikult mikrolaineahjus, kuid ärge keema, sest aurustamine võib muuta agaroosi protsenti. Veenduge, et kõik agaroosid on lahustunud, loksutatakse põhjalikult segamiseks, lastakse veidi jahtuda ja seejärel lisatakse 0,5 mikrogrammi milliliitri etiidiumbromiidi kohta. Ärge hingake sisse auru, kuna see võib ärritada kopsusid ja limaskesta. Samuti ei kuumuta lahust pärast etiidiumbromiidi lisamist. Segage uuesti loksutamiseks ja siis, kui lahus on veel piisavalt kuum, et see välja voolaks, jaotage see ettevalmistatud alusele. Pange tähele, et kui on olemas suur kogus proovi või väikest DNA kontsentratsiooni, võib olla valmistatud paksem geel. Kuid peenemaid geele on lihtsam analüüsida, sest need on selgemalt pildistatud.
-
Asetage kammid geelisse, et luua asetatavad proovid sooned või süvendid. Laske sellel jahtuda toatemperatuurini mitu tundi või külmkapis mõni minut. Viimasel juhul, kui geel on valmis, tuleb jälgida agaroosikristallide olemasolu. Üldiselt kaovad nad siis, kui geelil lastakse enne kasutamist mõne minuti jooksul toatemperatuurini soojeneda. Eemaldage kammid ettevaatlikult, et mitte geeli lõhkuda ega kaevusid murda. Agaroosgeel on nüüd kasutamiseks valmis. Kui seda kohe ei kasutata, tuleb see pakendada tsellofaani või hoida külmkapis plastikpakendis, et vältida selle kuivamist või sulamist.
Agaroosigeeli valmistamine
Teade
- Kasutatud reaktiivid on võimalikud kantserogeenid ja neid tuleb käsitseda ettevaatlikult ja piisava kaitsega. Kui geeli valmistamise käigus tekib viga, ei tohi seda kunagi kuumutada, vaid eemaldada ja uuesti valmistada uus geel.
Mida sa vajad
- Agaroosipulber elektroforeesiks
- TAE või TBE puhver
- Etiidiumbromiidi lahus
- Geelibaas
- Tape või geelklambrid
- Geelikambrid
- Kaalud ja tarbekaubad
- Etanool
- Laboratoorsed käterätikud
- Isikukaitsevahendid